Linked ImmunoSorbent assay (ELISA)

Linked ImmunoSorbent assay (ELISA) - moderné laboratórne testy, pri ktorých sa vykonáva vyhľadávanie špecifických protilátok v krvi alebo antigény na konkrétne ochorenie, s cieľom určiť nielen príčinu, ale štádium ochorenia. Výsledky ELISA možno vydať ako kvalitatívny a kvantitatívny.

V súčasnej dobe, ELISA sa používa v nasledujúcich situáciách:

1) vyhľadávanie špecifických protilátok na akékoľvek infekcie zabolevaniyu-
2) hľadať antigény chorobám (infekčných ochorení, pohlavnými) -
3) štúdie hormonálny stav patsienta-
4) screening onkomarkery-
5) testovanie na prítomnosť autoimunitných ochorení.

Výhody ELISA:

1) Vysoká špecifickosť a citlivosť testu ELISA (viac ako 90%).
2) Schopnosť tejto chorobe dynamiky procesu, tj porovnanie množstva protilátok v rôznych časových intervaloch určiť a kontrolovať.
3) ELISA diagnostické dostupnosť v každom zdravotníckom zariadení.

Relatívna nedostatok:

1) Detekcia imunitnú odpoveď (protilátky), ale nie z patogénu.

základné pojmy

Pred objasniť podstatu metódy ELISA, stručne to pochopiť niektoré pojmy.
Protilátky (alebo imunoglobulíny - Ig) - špecifické proteíny produkované B -
lymfocyty (bunky imunitného systému), v reakcii na vstupe do tela infekčného patogénu (vírusy, baktérie, huby, atď.) Vylučujú imunoglobulínu A (IgA), imunoglobulínu E (IgE), imunoglobulín M (IgM), imunoglobulín G (IgG), imunoglobulín D (IgD). Líšia sa od seba navzájom a tvoria molekulovú hmotnosť polovice životné účasť / nonparticipation v infekčných procesov, rozpoznať časovanie od okamihu infekcie. Ak vezmeme do úvahy molekulovej hmotnosti, najviac je to IgM - je pentamer (950000 Da), na rozdiel od zvyšku Ig (150 až 200 000 Da), tak IgM jednoducho nemôžu prechádzať cez placentu. Preto je detekcia IgM v detskej 1 roku života je vždy príznakom infekcie u plodu. Prevažná sérových imunoglobulínov je reprezentovaný IgG (75-85%) a najnižší - IgE (0,003%). Infekčné proces priamo zapojený pričom iba IgA, M, G. IgE sú známkou alergickými reakciami a podmienkami, a IgD - môžu byť detekované iba v lymfatických uzlinách a tonzíl, hrá úlohu pri tvorbe lokálnej imunitu.

tried imunoglobulínov

antigény - vysokomolekulárne organické látky, najmä infekčných patogénov a ďalších chorôb, ako aj rôzne látky modifikované bunky sú produkované v danom ochorení (autoimunitné ochorenie, rakoviny).

imunitný komplex - antigén-protilátka, ktoré sa podieľajú na imunitný procesu.

Na čom je metóda ELISA.

Existuje niekoľko druhov ELISA (priama, nepriama, blokujúce metóda súťažiacim), ale v praxi sa najčastejšie používajú heterogénne enzýmového imunologického testu alebo ELISA testu (enzyme linked ImmunoSorbent assay)

Základom imunoanalýzy imunitné reakcie antigénu a protilátky pre vytvorenie imunitného komplexu: antigén-protilátka, čo malo za následok zmenu v enzymatickej aktivity konkrétnych značiek na povrchu protilátky.

Podstatou metódy ELISA

Jednoducho povedané, tento proces môže byť rozdelený do niekoľkých etáp:

1) na povrchu dosky lekár-jamkové prieskumový je vyčistený antigén špecifický patogén. Pri pridanie biologického materiálu (v krvnom sére) pacienta špecifické reakcii dochádza medzi antigénom a požadované protilátky (imunoglobulínu). Toto spojenie bude fungovať ako "zvláštny antigénu" v ďalšej etape.

2) V tejto fáze je IR formácie (imunokomplexy) - reakcia medzi "špecifický antigén" a konjugátu (to imunoglobulínu značená peroxidázou enzýmu). Pridá špeciálny chromogén. Výsledkom tejto enzymatické reakcie je tvorba farebných látok v jamkách doštičky, intenzita farby, ktorá je závislá od počtu imunoglobulínov pacientov (protilátky), obsiahnutých v materiáli.

3) Ďalej Interpretácia: fotometria s použitím viackanálové spektrofotometra porovnaním optickej hustoty testovaného materiálu s optickou hustotou kontrolných vzoriek, matematické spracovanie výsledkov. Množstvo protilátky v pacientovi, závisí na výške optická hustota jamiek.

Zvyčajne v praxi použitie 96-jamkových doštičiek.

Pri meraní optickej hustoty (OD) Objem vypočíta kvapalný vzorku (alebo koncentrácia) špecifické protilátky v jednotke objemu. Výsledkom je potom v porovnaní s kontrolnou vzorkou.

Treba mať na pamäti:pre každý testovací systém vyvinutý brať do úvahy výsledky individuálneho výkonu, štandardy výkonu a patológiu (tzn "referenčné hodnoty"). To by sa malo vziať do úvahy pri hodnotení výsledkov každej prípadové štúdie. Správne interpretovať výsledky laboratórnych "referenčné hodnoty" iné laboratóriá. Je tiež nesprávne porovnať výsledky z rôznych laboratórií spoločne.

Pri stanovení ELISA reakcie a má takú hodnotu, koncept ako protilátky avidity.
avidity protilátky - väzba pevnosť protilátky k antigénu a množstva antigénu sa nachádza vo vzájomnom vzťahu s immnoglobulinami (protilátky). Avidita má veľký význam pri posudzovaní údajnej infekcie termíne, čo je veľmi dôležité pri diagnóze primárnej infekcie u tehotných žien.

Základ testovaná protilátka avidita zahŕňa reakciu imunitného komplexu (antigén-protilátka) roztoku močoviny s cieľom zničiť proteín. Vysokoavidnye odkazy zostanú neporušené a nízke avidity zničené. Výsledok sa udáva ako index avidity, vyjadrený v percentách (%).

Aké choroby sú detekované ELISA-diagnostika?

1. Infekčné choroby
1.1 Vírusová hepatitída A (IgM, G), B antigény -HBsAg, HBeAg, protilátka - IgM HBcorAg, Ig celkový HBcorAg, IgG HBeAg), C (protilátka Ig M, G HCV), D (IgM, G), E (Ig M, G) a ďalšie.
1,2 HIV infekcie (IgG)
1.3 infekcia cytomegalovírusom (protilátky IgM, G)
1,4 Epstein-Barrovej alebo infekcia mononkleoz (IgM, G EA, VCA, NA vírusové proteíny)
1,5 Herpetické infekcie (IgM, G)
1,6 toxoplazmóza (IgM, G)
1,7 Rubella (IgM, G)
1.8 Osýpky (IgM, G), brucelóza (IgM, G), pseudotuberculosis (IgM, G), salmonelózy (IgM, G), šigelóza alebo úplavica (IgM, G), aspergilóza (IgM, G), kliešťová encefalitída, borelióza a mnoho ďalších.
1,9 parazitózy (giardiáza, toxokaróza, Trichinóza, opistorhoz, echinokokóza, alveococcosis a ďalšie), v ktorej je detekovaná IgG
1.10 STD (pohlavne prenosných chorôb prostredníctvom) - mykoplazmóza (IgM, G), Ureaplasmosis (IgM, G), chlamýdie (IgA, M, G), syfilis (IgG)
1,11 Helicobacter infekcie (IgG)

2. Markery autoimunitných ochorení a imunitný systém ukazovatele ľudských (Total IgE, celkového IgG, celkový IgA, IgM celkom, celkový IgD, sekrečné IgA, IgG2, IgG4, CRC cirkulujúcich imunokomplexov, IgA a IgG protilátok proti gliadínu a ďalšie)

3. Onkologichsekie markery (TNF - tumor nekrotizujúci faktor, CEA - karcinoembryonální antigén, PSA - prostatický špecifický antigén, hCG - ľudský choriogonadotropín, CA 125, alveomutsin a mnoho ďalších)

4. poruchy reprodukcieI (estradiol, progesterón, prolaktín, testosterón, AFP AFP-, FSH - folikuly stimulujúci hormón, a ďalšie)

5. Ochorenie štítnej žľazy (Voľný a viazaný T3, T4, tyreoglobulínu, štítnej žľazy peroxidáza - TPO, hormón stimulujúci štítnu žľazu - TTG).

Tento zoznam nie je v žiadnom prípade všetky choroby sú diagnostikované testom ELISA.

Materiál pre analýzu ELISA a pravidlá plot jej

Najbežnejší materiál pre reakciu IFA - pacientovho séra, ktoré bolo prijaté na lačno. Materiál môže tiež slúžiť ako mozgovomiechový mok, plodová voda, sklovitých obsah, hlienu krčka maternice a uretry tampóny.

Príprava pacientov na dodávku materiálu pre IFA

Odoberie sa krv na lačný žalúdok. Pred dodaním krvi nemusia brať žiadne lieky. Špecifická liečba (antibakteriálne, antivírusové, proti parazitom, a tak ďalej), musí byť zastavený najmenej 2 týždne pred štúdiou.

IFA podmienky výroby

Imunosorbent materiál sa koná rýchlo počas dňa. Oneskorenie môže byť v rôznych laboratóriách v dôsledku nahromadenia určitého množstva séra.

Možné výsledky diagnostiky ELISA

Pri posudzovaní výsledkov určitých infekcií je dôležitá trieda protilátok identifikovaných a ich počtu. To má vplyv nielen na otázku etiológie infekcie (tj, alebo nie), ale odhaduje štádium ochorenia (akútne a chronické), rovnako ako prítomnosť aktívnej infekcie (akútne alebo exacerbácie chronickej) v čase prieskumu.

Aké sú približné načasovanie protilátok (imunoglobulínov - Ig)?

Najskôr IgM protilátky. Môžu identifikovať pomocou 1-3 týždňov po prípadnej infekcie, ktoré sú charakteristické pre akútnu fázu infekcie. Druhý prípad je vzhľad IgM protilátok - aktivácia (alebo exacerbácia) chronický proces. IgM protilátky cirkulujú v priemere asi 3 mesiace, potom sa ich počet postupne mizne. Avšak u niektorých pacientov, stopové množstvá IgM môžu byť detekované v priebehu 1-2 rokov po infekcii.

Moderné testovacie systémy sú veľmi citlivé, takže tam sú nešpecifické falošne pozitívne výsledky (často u tehotných žien). Preto pozitívne IgM u tejto skupiny pacientov by mali byť prekontrolované!

IgA protilátky objavujú 2-4 týždne po infekcii, ale v množstve dostatočnom pre detekciu - mesiac. Sérum IgA syntetizovaný plazmatickými bunkami sleziny, lymfatických uzlín a slizničných sekrečných IgA sústredených na sliznice plniť svoju ochrannú funkciu - podieľajúcich sa na lokálnu imunitu.

Na štvrtý týždeň po infekcii sa začínajú objavovať IgG protilátky. Vo väčšine infekcií titer postupne zvyšuje, s maximom v rôznych časoch (v priemere 1,5-2 mesiacov), potom je titer zostáva na nízkej úrovni, a označuje imunitu. V niektorých ochorení (mykoplazmózy, chlamýdie, trichomoniáza) hladina IgG nie je vysoká, je výrazne znížená v dôsledku nedostatku imunity u týchto infekcií.

Detekcia prevedenie protilátok z rôznych tried:

- Izolovaná detekcia IgM protilátky znamená, že existuje primárne
infekciu.
- Simultánne detekciu krvi IgM a IgG typické pre primárne infekcie
V posledných 2-3 mesiacov, ako aj zhoršenie chronických ochorení. Preto je prítomnosť IgM v tehotenstve nie je vždy údaj o počiatočnej infekcie.
- Detekcia IgG izolovaný a môže ukazovať na imunitu proti ochoreniu,
a chronická infekcia. V druhom prípade je nastavený a množstvo protilátok (titra) a zmenou dynamiky titru. Typicky, boli vykonané štúdie s intervalom 2-4-6 týždňov.
- Detekcia IgA alebo IgM izolované ukazujú primárnu infekciu. na
spolu s výskytom IgA IgG predpokladá aktivácii chronickej infekcie (priemerné 2 týždne od okamihu exacerbácie).

definícia IgG avidity je perfektným doplnkom k diagnóze primárnej infekcie fáze dlhotrvajúci infekcia, ktorá má svoj klinický význam, a to najmä pri posudzovaní rizika intrauterinnú infekciu. Detekcia nízkej avidity IgG indikuje primárnej infekcii a identifikuje priemer po 4-6 mesiacov po infekcii, zriedka dlhšie. Nízka avidity IgG vyžadovať ďalšie laboratórne dôkaz primárnej infekcie (IgM). S vysokou aviditou protilátky sú buď znakom chronických ochorení a akútnej alebo vytvorené imunity.

Najmä u detí:u detí do jedného roka, a niekedy aj 1,5 rokov v krvi cirkulujúcej materskej IgG protilátok proti rôznym infekciám (tj bol ich prenikanie cez placentu z matky na plod v maternici). Je to samo o sebe svedčí o prítomnosti infekcie v prítomnosti. Ak sa vo veku takjm detekované IgM (pripomeňme, že materská IgM cez placentu nemôže), je to znamenie infekcie alebo vnútromaternicové infekcie získané po narodení.

Kvantitatívne metódy ELISA

diagnostika Výsledky ELISA (pomocou enzýmového imunotest analyzátorom) sa vydáva v určitých jednotkách:
- Optická hustota (OD) vzorky - koncentrácia špecifické protilátky na jednotku objemu. Čím vyššia je OD vzorky, tým vyššia je koncentrácia protilátok. Niektoré výsledky naznačujú, faktor pozitivity (CP) - je tiež optická hustota vzorky.
- Jednotky koncentrácie protilátky (ng / ml alebo ng / ml).
- V titru v sére: 1:20, 1:40, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800, 1: 1200 a tak ďalej. Diagnostické titre (v ktorom je diagnostikovaná choroba, skôr než na skutočnosť, infekcia) pre rôzne rôznymi chorobami.
- Vo forme symbolov - "+", "-" (+, ++, +++, ++++) "?".
- Pri kvalitatívnom posúdení hodnote kritéria (pozitívne alebo negatívne).

Správne odhadnúť množstvo protilátok variantných imunoglobulínov identifikácie triedy, a v dôsledku toho, vystaviť štádium ochorenia a potrebu len lekár môže liečiť.

Nesmieme zabudnúť, že ich "referenčná hodnota" (prevedenie norm) a nad ktorou je konkrétny diagnostikovaná choroba (varianty patológiu) vyvinutý pre akýkoľvek testovací systém. "Referenčné hodnoty" za rôznych testovacích systémov rôzne.

Správne porovnanie výsledkov ELISA, ktoré boli v priebehu času, je možné len v prípade, že ich výroby v rovnakom laboratóriu.