PCR diagnostika - analýzu na infekcie

Polymerázová reťazová reakcia (PCR), - presnosť molekulárnej genetickej diagnostiky, ktorá umožňuje osobe identifikovať rôzne infekčné a dedičné ochorenie, akútne a chronické fázy a predtým, ako sa choroba môže prejaviť.

Polymerázová reťazová reakcia (PCR) v roku 1983 vyvinul Myullis Cary (USA), za ktorý v roku 1993 získal Nobelovu cenu za chémiu.

PCR analýza pre väčšinu infekcií stala akousi "zlatý štandard". Väčšina odborníkov konfrontovaný s ním takmer každý deň a nie sú bez definitívne diagnózy. PCR je často iba reakcia na detekciu aktívnych fáz choroby vo chvíľach, kedy ostatní zlyhávajú bakteriologickú, virologické a imunologické diagnostických metód.

Výhody diagnostiky PCR v modernej medicíne:

• Priama detekcia prítomnosti patogénu (tj špecifickej časti DNA alebo RNA z patogénu) vo vzorke.
• Vysoká špecificita umožňuje definovať jedinečný úsek DNA alebo RNA charakteristické pre konkrétne patogénu, čo eliminuje možnosť falošných poplachov.
• Vysoká citlivosť metódy PCR možné detekovať aj jednotlivé bunky patogénov (vírusy, baktérie). Citlivosť PCR je 10-1000 vo vzorke bunky (napr., Citlivosť imunologických skúšok a mikroskopické - iba 103 až 105 buniek).
• Vývoj Universal PCR techniky pre detekciu rôznych patogénov. Predmetom štúdie pre PCR je genetický materiál (DNA, RNA) z patogénu. Metóda umožňuje identifikovať niekoľko patogénov z biologického vzorky.
• priniesť výsledky rýchlo dosť analýza. Kompletné vyšetrenie sa vykonáva po dobu 4-4,5 hodiny, najmenej - o niečo dlhšie.
• Schopnosť detekovať patogénmi príznakov ochorenia (predklinické Diagnostics) a prenosné choroby (retrospektívna diagnóza). Príkladom predklinického diagnózy budú skúmané v inkubačnej doby (od okamihu infekcie pokiaľ ide o vzhľad ťažkosti pacienta), ako aj latentná infekcia (ak vôbec žiadne príznaky, ale iba laboratórnych dát - PCR, napríklad). Jedným z vrcholov PCR diagnostiky vykonáva PCR v archívnych materiálov alebo biologických zvyškov, čo je dôležité pre identifikáciu alebo otcovstva.

V súčasnej dobe, PCR diagnostika prechádza významný vývoj. Bude zlepšenie spôsobu, dobe stále ešte existujú nové odrody PCR, lekárska trh dostáva nový testovací systém pre túto reakciu. Tak náklady na analýzy je stále dostupnejšie pre širokú škálu pacientov ročne.

Čo je základom metódou PCR

Základom pre PCR sa opakuje zdvojnásobenie (amplifikácia) z určitej časti DNA alebo RNA prostredníctvom enzýmov in vitro. Výsledkom je množstvo DNA alebo RNA postačujúca pre vizuálnu analýzu. Štúdia sa skopíruje iba časť, ktorá vyhovuje dané podmienky, a to len v prípade svojej prítomnosti v testovanej vzorke.

Napríklad, materiál pre túto štúdiu, predpokladá, že obsahuje fragmenty DNA alebo RNA z patogénu (sliny, krv, moč, výtok z genitálií) sa umiestni do špeciálneho reaktora (termocykléra). Ďalej k tomu sa pridá špecifické enzýmy, ktoré sa viažu na patogénne DNA alebo RNA, a syntézu jeho kópiu. Dodáva sa v niekoľkých fázach typu "reťazová reakcia", a na konci jednej kópie genetického materiálu môže byť vytvorená a stovky tisíc kópií. Potom príde analýzu a porovnanie výsledkov s dostupných databáz o štruktúre rôznych patogénov. Prostredníctvom PCR je možné nielen identifikovať typ patogénov, ale tiež, aby kvantitatívne výsledky analýzy, ktorá je, ako veľa patogény v ľudskom tele.

PCR je v súčasnej dobe rozširuje okruh možností výskumu v zavedenia mutácií, spájanie fragmentov DNA, a široko používaný v lekárstve, napríklad pre stanovenie otcovstva, vznik nových génov a tak ďalej.

Čo infekcie môže byť detekovaný PCR diagnostika

1) HIV infekcie (dokáže detekovať vírusu ľudskej imunodeficiencie HIV-1)
2) vírusová hepatitída A, B, C, G (RNA-HAV, HBV DNA, RNA-HCV RNA-HGV)
3) infekčná mononukleóza (Epstein-Barr DNA -VEB)
4) cytomegalovírus (DNA-CMV)
5) Herpes infekcie (herpes simplex vírus DNA HSV typ 1 a 2)
6) STI (pohlavne prenosných ochorení podľa) - ureaplasmosis, bakteriálna vaginóza, chlamýdie, mykoplazmózy, trichomoniáza,
7) tuberkulóza (Mycobacterium tuberculosis)
8) onkogénne vírusy - papilomavírusom (ľudský papilloma vírus (vrátane jeho onkogénnych typov 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58, a 59)
9) borrelióza, kliešťová encefalitída
10) listerióza
11) Candida (huby Candida rodu)
12), Helicobacter infekcie (Helicobacter pylori)
a ďalšie

Vzhľadom na rozsah patogénov, PCR diagnostika je široko používaný v gynekologických, urologických prax, prax, infekčných chorôb, pneumológiu, TB, gastroenterológie, hematológie, onkológie a ďalšie.

Materiál pre štúdium a pravidlá jej plotu

Materiál pre analýzu PCR, ktoré môžu identifikovať cudzej DNA z baktérie alebo DNA alebo RNA vírusu môže slúžiť rôznu biologickú životné prostredie a ľudské tekutiny: hlienu, moču, krv, spútum, škrabanie epiteliálne bunky, tkanivá, placenta, krv, prostaty džús, plodovú vodu, pleurálna tekutina.

Keď screening pohlavne prenosných infekcií (STI) medzi mužmi a ženami sú prevzaté z pohlavných orgánov, ohováračské či zoškrabať z krčka maternice alebo škrípanie z močovej trubice (močovej trubice), moč.

Pri skríningu na infekciu (herpes infekcia, infekcia CMV, mononukleóza, toxoplazmózy, hepatitída B a C, HIV) PCR odstúpiť krv.

Pre diagnostiku infekčnej mononukleózy, cytomegalovírusom infekcie, herpes infekcia hrdla výter je považovaná za screening CMV - moču. Často sa na zisťovanie o nervové poškodenie systému v celej rade štúdií prijatých mozgovomiechová mok.

V Pulmonologie materiálu je spútum, pleurálna tekutina.

Pri skríningu na infekcia plodu - plodovej vody, placenta tkaniva.

Príprava pre dodávanie materiálu a riadenie diagnostika PCR

Takmer u všetkých pacientov podstupujúcich diagnostické PCR, sa môžu spoľahnúť na spoľahlivé, presné a rýchle výsledky, ktoré závisí do značnej miery na možnosti laboratória, odborných laboratórnych lekári. V rovnakej dobe, mnohí si neuvedomujú, že najspoľahlivejšie do značnej miery závisí na seba, a to na základe odporúčania ošetrujúceho lekára, životného štýlu a správnosť plotového materiálu. Keď plot materiál požadované podmienky bez kontaminácie (znečistenia) materiálu, a preto pochybnosti o objektivite analýzy.

Správna príprava pre dodávku materiálu, nepredstavuje žiadne ťažkosti. Odporúčania V nasledujúcom lekárov pre pacientov

1) nebude mať pohlavný styk v deň pred dátumom materiala-
2) krvné pre výskum zaoberal ráno na lačný žalúdok (nejesť, nepiť) -
3) V čase, keď sa prvý ranného moču sa deje časť do čistej sterilnej nádoby.

Termíny pripravenosť PCR

Konečný výsledok je pripravená v 1,5-2 dní odo dňa doručenia materiálu. V niektorých prípadoch je výsledok je pripravený pre prvý deň.

Dešifrovanie výsledkov PCR

negatívny PCR výsledok ukazuje, že testovaná látka v čase dodania neboli nájdené žiadne stopy infekčných agens. Väčšina týchto prípadov ukazuje nedostatok infekcia, ktorá sa snaží nájsť v testovanej vzorke.

pozitívne PCR výsledok ukazuje detekciu stopy infekcie v testovanej biologickom vzorky. S veľkou presnosťou pozitívny výsledok ukazuje na prítomnosť infekcie v danom čase.

Existujú situácie, kedy PCR je pozitívny, ale aktívnej infekcie nemôže hovoriť - takzvaný "zdravý nosič" bez klinických príznakov ochorenia, ktorá nevyžaduje liečbu, ale vyžaduje dynamickú kontrolu zo strany lekára. To sa vyskytuje častejšie v rade vírusových infekcií (HPV, CMV, EBV infekcie, herpes infekcie, a ďalšie), v materiáloch, ako sú sliny, hrabľovom krčka maternice, močovú trubicu, ktorá je, z lokálnej zamerania. Avšak nesmieme zabúdať, že prenos nákazy z nosičov na zdravých ľudí môže ako prechod do chronickej formy ochorenia s aktivačným procesom. V prípade, že je pozitívny PCR v krvi, potom je bez nosiča, a vyžaduje osobitné zaobchádzanie.

Kvantitatívne PCR je hodnotená lekárom individuálne pre konkrétny infekciu samostatne a nemá žiadne spoločné prechody. Na základe výsledku kvantitatívnej PCR môže lekár určiť úroveň aktivity infekcie a vystaviť štádium ochorenia, čo je určite vplyv na priebeh a lieky dávky predpísané základe.

Jedna z posledných otázok obavy: ako presný PCR diagnostiku?

3 je definícia pre PCR analýzu:

1. Presnosť (s vysokou pravdepodobnosťou môže identifikovať alebo absencia infekcie).
2. špecifickosť (presnosť detekcie určitého infekcie).
3. Citlivosť (aj pri nízkych úrovniach patogénov genetického materiálu vo vzorke sa detekuje infekcie).

Polymerázová reťazová reakcia je takmer nedáva falošne pozitívne (tj, neexistuje žiadny pozitívne vzorky, kde infekcia je prítomný). Falošne negatívne výsledky sú zriedkavé (najčastejšie je to z dôvodu nedostatku aktívnej infekcie u ľudí v tomto okamihu). Napríklad, latentnej infekcii, chronickej infekcie je aktívna.